该研究共分析了161例ER+/HER2-晚期乳腺癌患者的血浆样本，所有患者既往均接受过内分泌治疗和CDK4/6抑制剂治疗。使用两种下一代测序（NGS）检测组合进行ESR1突变分析，并将变异检测的灵敏度阈值设定为检测限（LOD）≤0.5%，以确保检测结果的可靠性。

在分析的161例样本中，20例（12.4%）因LOD>0.5%不符合ESR1分析标准，剩余141例样本LOD≤0.5%，为有效样本。

在141例有效样本中，PIK3CA是最常见的突变基因（45例，31.9%），ESR1突变紧随其后（41例，29.1%），TP53基因位列第三（39例，27.7%）。AKT1基因变异的检出率为2.8%（4/141）；PTEN基因变异的检出率为2.8%（4/141），其他基因变异占比为5.0%（7/141）。

最常见的ESR1变异类型为p.(Asp538Gly)（53.7%，22/41），其次为p.(Tyr537Asn)（34.1%，14/41）和p.(Glu380Gln)（29.3%，12/41）。

总体而言，在141例有效样本中，17.7%（25/141）存在ESR1突变与其他基因的共突变；在41例ESR1突变病例中，16例（39%）仅检测到单一ESR1变异，12例（29.3%）检测到多重ESR1突变，25例（61.0%）同时携带其他基因突变，其中最常见的组合为ESR1与PIK3CA共突变（15/41），另有5例同时检测到ESR1、PIK3CA和TP53三种基因变异。

在100例ESR1野生型病例中，48例（48.0%）未检出任何突变，另外52例（52.0%）至少存在一种非ESR1突变，其中PIK3CA（25例）和TP53（32例）突变较为常见。其他基因变异情况如下：AKT1（3例）、SF3B1（1例）、BRAF（2例）、ERBB2（2例）、PTEN（3例）及KRAS（2例）。另有17例样本携带多重突变。

ESR1变异的中位VAF为1.46%（平均值为3.01%，范围0.21%至24.2%），其中81.4%的VAF低于5%，42.4%低于1%，32.2%低于0.5%。

通过液体活检检测ctDNA中的ESR1突变，以微创方式替代基于实体组织的基因分型实现肿瘤分子评估，有助于分析肿瘤克隆演化、早期识别耐药迹象，并为及时调整内分泌治疗策略提供依据，从而推动个体化治疗并改善患者预后。

该研究对161例ER+/HER2-晚期乳腺癌患者样本的分析证实了ESR1基因突变检测的重要性。ESR1突变在符合条件样本中的检出率约为30%，与既往文献报道一致——既往接受过芳香化酶抑制剂治疗的患者，其ctDNA中ESR1突变检出率介于20%-40%之间。突变谱以p.Asp538Gly和p.Tyr537Asn为主，亦与大规模队列研究结果相符。

值得关注的是，该研究中共突变发生率较高，尤其在ESR1突变病例中，超过60%伴有PIK3CA或TP53等基因变异。这提示多个肿瘤亚克隆之间可能存在致癌协同作用，这一发现或将影响治疗效果及靶向治疗方案的选择。例如，约三分之一的病例中观察到ESR1与PIK3CA共突变，这两种基因突变对PI3K抑制剂及选择性雌激素受体降解剂（SERD）的疗效具有重要临床意义。这表明，ER+/HER2-晚期乳腺癌不仅会对内分泌治疗产生耐药，还可能经历复杂的克隆演化，可能需要采用联合治疗策略。

此外，该研究也存在一定局限性：首先，由于缺乏详细的临床随访数据，因此无法将识别出的突变与治疗反应或生存结局建立关联。其次，尽管采用两种NGS检测组合的结果无统计学差异，但不同检测方法仍可能引入偏倚。第三，该研究近三分之一突变样本中检出的低频ESR1突变（VAF<0.5%），其临床意义仍需进一步探索。