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第29届欧洲血液学会（EHA）年会即将于2024年6月13日-16日在西班牙马德里召开，世界各国血液领域的专家汇聚一堂，共同探讨血液学最新的临床和基础研究成果，在这场学术盛宴中，北京大学人民医院张晓辉教授团队有4篇研究入选oral部分，4篇研究入选poster部分。医脉通小编将这8篇研究成果进行整理，与读者共飨EHA会议上的中国风采。
Oral 摘要号：S266
标题：Development and validation of a prognostic model for mixed phenotype acute leukemia patients treated with allogeneic hematopoietic stem cell transplantation in a nationwide multicenter study
中文标题：异基因造血干细胞移植治疗混合表型急性白血病患者预后模型的建立和验证
第一作者：童科婷
通讯作者：张晓辉
背景：混合表型急性白血病（Mixed phenotype acute leukemia，MPAL）是一种罕见但严重的急性白血病，目前仍不清楚其最佳治疗方案。异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）是一种较为有效的治疗选择，可获得较好的长期生存，但是MPAL的移植指征目前仍未确定。在这个全国多中心研究中，研究者探究了接受异基因造血干细胞移植的MPAL患者的临床特征与预后。
目的：研究者建立并验证了一个基于患者特征、临床检查和移植相关信息的MPAL预后模型。
方法：研究者回顾性地研究了2008年至2022年27家医院接受移植的201例新发MPAL患者。这些患者的免疫分型均符合MPAL的WHO诊断标准。开发组和外部验证组分别包含114例和87例患者。患者特征、临床检查和移植相关信息被纳入预后因素分析中。研究者首先通过单因素分析来确定各个因素与预后生存的相关性，p值小于0.1的因素被纳入了Cox多因素分析。通过多因素分析仍留在最终的模型中的变量被视为独立预后因素。模型的建立基于Cox回归模型的系数。通过区分度[曲线下面积（AUC）]、校准度（校准图）和净收益[决策曲线分析（DCA）]来评估模型。
结果：一共201例接受了allo-HSCT的MPAL患者被被纳入研究。3年总生存率是75.1%（95%CI 68.6-80.9）。在多因素分析中，4个独立预后因素被纳入模型：诊断时的血小板计数（PLT）（p＜0.001；OR 0.99；95%CI 0.99-1.00）、纤维蛋白原（p＝0.611；OR 0.91；95%CI 0.63-1.31）、细胞遗传学（p＝0.005；OR 2.28；95%CI 1.28-4.06）和预处理方案（p＝0.060；OR 0.55；95%CI 0.3-1.03）。研究者根据回归系数建立了风险分级模型。PLT<100×109/L和纤维蛋白原<2g/L各1分，高危细胞遗传学和清髓性预处理各2分。将这些分数相加得出总体风险评分，并将患者分为低危组（0-3分）和高危组（4-6分）。该模型有良好的区分度和校准度。决策曲线分析表明，预后模型的临床实施有利于MPAL患者。Kaplan-Meier对总生存率的估计验证了这些风险组之间的良好分离。
结论：研究者建立了一个综合预后模型并进行了外部验证，这是首个结合临床和实验室危险因素的MPAL预后模型。该模型可以有效地协助移植前的评估、分层和治疗决策。
Oral 摘要号：S317
标题：Zanubrutinib and eltrombopag as second-line treatments for patients with immune thrombocytopenia: An open-label, randomized, controlled, phase 2 trial
中文标题：
第一作者：王辰璁
通讯作者：张晓辉
背景：免疫性血小板减少（ITP）是一种获得性的免疫介导性疾病，其主要表现为孤立的血小板减少，免疫耐受的缺失导致了患者体内血小板破坏增多，生成减少。
目的：研究泽布替尼治疗难治复发性ITP的有效性和安全性。
方法：研究纳入年龄18~70岁的难治/复发性ITP患者：至少有2次血小板计数低于30×109/L，且在入组前15日内，间隔不少于7日；接受足剂量糖皮质激素治疗未达到持续至少4周的疗效，或者在糖皮质激素减量期间或停药后复发。患者被随机平均分配为治疗组和对照组。治疗组患者口服泽布替尼每日80 mg联合艾曲泊帕每日50mg，持续6周。对照组仅接受相同剂量的艾曲泊帕治疗。在治疗期间，两组均根据血小板计数调整艾曲泊帕的剂量。治疗开始后的前6周内每周随访1次，6周至6个月时每2周1次，6个月至12个月时每1个月1次。主要观察终点是总体反应率（OR）：治疗6周时至少连续2次血小板计数≥50×109/L、基线血小板计数至少增加2倍、无出血以及不需要挽救性治疗。
结果：从2022年10月30日至2023年12月31日，该研究共入组了了75例符合纳入标准的患者。其中4例因各种原因出组，71例接受随机分配：治疗组35例，对照组36例。在12个月随访时，接受泽布替尼联合艾曲泊帕治疗的患者达到总缓解的比例高于接受艾曲泊帕单药治疗的患者（27[77.1%]/35VS20[55%]/36，比值比2.12，95% CI 1.5~6.02; p< 0.05）。所有患者对治疗耐受性良好，无需停药或减量。
结论：泽布替尼联合艾曲泊帕的二线方案在难治性ITP患者缓解率较好，且耐受性较高。该研究结果提示，对于糖皮质激素耐药或难治性原发ITP患者，泽布替尼等BTK抑制剂可能是很有前景的候选药物。
Oral 摘要号：S335
标题：Epitope base editing in haematopoietic cells overcomes the off-target effects of T-ALL bitargeted immunotherapy
中文标题：造血干细胞的抗原表位编辑技术助力解决T系白血病双靶向免疫治疗的脱靶毒性
第一作者：王国玲
通讯作者：张晓辉
背景：复发和/或难治性T细胞
方法：用linker将靶向CD5/CD7的人源化重链抗体串联，构建tan5/7-4 1BB-CD3ζ CAR载体，然后进行慢病毒包装并感染T细胞技术构建纳米双CAR-T细胞。利用抗原-抗体对接及抗原
结果：在研究者的前期临床实验中，CD7阴性复发患者进行基因组测序分析，发现肿瘤细胞CD7抗原发生了移码突变造成抗原脱落。为减少单靶点丢失造成的治疗失败，研究者设计并构建了纳米tan5/7CAR或tan7CAR-T细胞，体外共培养实验显示可有效杀伤CD5/CD7单阳或多阳肿瘤细胞，对CCRF-CEM/JURKAT等T-ALL细胞系的体外杀伤比例高于单阳CAR-T细胞及对照T细胞。
前期实验中研究者还观察到CD7+T细胞在输注后15天内迅速被清除，接受CD7 CAR-T输注的患者体内仅残留CD7-T细胞。实验分析表明，CD7 CAR后的CD7-T细胞以效应/记忆表型为主、缺乏幼稚细胞群、胸腺输出水平降低、TCR多样性减少。研究者通过scRNA-seq分析对CD7-T细胞的分析发现CD7-T细胞群主要由CD8+GZMK+细胞组成。对T细胞进行了拟时间分析显示CD7-CD8+T细胞分布在路径两端，少量CD7-T细胞分布在起始端，而大多数CD7-CD8+GZMK+T细胞分布在T细胞轨迹路径的后段，表明这组T细胞处于T细胞分化的晚期阶段。为减少靶点联合对免疫系统的脱靶毒性作用，研究者对2种抗原分别进行了丙氨酸突变筛选，通过流式细胞术筛选了抗原抗体不能结合的单碱基突变体。然后将根据单碱基突变设计sgRNA，利用ABE8e单碱基编辑器对造血干细胞进行高效的非双链断裂的精准编辑，表位编辑后的HSC细胞均保留有正常的免疫重建功能，且分化出的正常血液细胞不能被双CAR识别杀伤。
结论：该研究提出一种抗原表位编辑的造血干细胞移植联合新型双靶点CAR-T治疗策略，CD7联合CD5的双重靶向可以减少单靶点丢失造成的治疗失败，而抗原表位编辑的HSCT使血液细胞对CAR-T“隐身”，二者结合旨在提高r/r T-ALL患者治疗成功率并减少对免疫系统的毒性。
Oral 摘要号：S336
标题：Ultrasensitive biosensor for noninvasive diagnosis of T-lymphoblastic leukemia/lymphoma
中文标题：超灵敏生物传感器用于T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤的无创诊断
第一作者：王婷
通讯作者：张晓辉
背景：T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤（T-ALL/LBL）是一种未成熟T细胞恶性增殖引起的血液系统恶性肿瘤，严重影响白细胞和淋巴细胞，具有侵袭性强和进展快的特点。目前T-ALL/LBL的诊断依赖于免疫分型，这是一种侵入性的、昂贵的、需要专业操作的方法。侵入性组织活检是获得分子数据和将淋巴瘤患者分类为遗传亚型的金标准。然而，对于病情危重、肿瘤不可切除或依从性低的患者，手术干预是不可行的，这使得患者无法进行组织活检。因此迫切需要开发一种方便、灵敏、特异的检测基因重排、耐药高频突变或EBV相关感染的方法。然而，现有的第一代测序（FGS）和二代测序（NGS）等方法存在灵敏度低、耗时长、成本高等局限性。为了克服这些缺点，开发一种低成本的超灵敏生物传感器用于无创诊断具有很大的潜力。
目的：建立基于CRISPR高灵敏度和强特异性的多功能一体化生物标志物检测生物传感器用于T-ALL/LBL的无创诊断。
方法：研究者利用CRISPR/Cas9-Cas12a生物传感器开发了一种准确灵敏的T-ALL/LBL诊断方法。它采用具有单链缺口活性的sgRNA：Cas9n复合体、一个链置换DNA聚合酶和两个具有Cas9n切割位点序列的引物，通过引物、延伸、缺口和位移反应的循环过程促进DNA的循环扩增。然后通过crRNA触发的Cas12a反应检测扩增片段，结果可以在蓝灯下可视化或通过荧光读取器测量。此外，它适用于基于横向流量读数生物传感器的低成本护理点（POC）测试。最后，研究者在基因模型和120例T-ALL/LBL患者样本上验证了其方法。
结果：CRISPR/Cas在T-ALL/LBL诊断中具有较高的准确性、特异性和敏感性，在核酸可编程检测方面具有很大的前景。基于此，研究者设计了一种Cas9n-Cas12a核酸检测生物传感器，用于T-ALL/LBL诊断中的基因重排和突变检测。灵敏、高效地检测高频基因突变和融合对于T-ALL/LBL的精确诊断和治疗至关重要。研究者选择了以下突变位点：ALL和FLT3中的DNMT3A、ETV6、IDH2、JAK1、JAK3和SETD2, LBL中的NRAS/KRAS、DNMT3A、IDH1和IDH2。该方法能够在大量复杂背景的生物样本中检测出高显著性的基因突变和融合，并在低至0.1%的水平上进行区分。研究者以qPCR以及NGS作为参考对照，比较了120例T-ALL/LBL患者的CRISPR检测结果。结果表明，CRISPR检测和传统方法均具有100%的特异性。EBV是一种普遍存在的致癌病毒，感染疱疹病毒科，通常与淋巴瘤有关，特别是免疫抑制患者，如T-ALL/LBL患者或移植患者。在该研究中，研究者基于Cas9-Cas12a和侧流生物传感器的结合，开发了一种简单灵敏的EBV检测方法。此外，该方法还可以鉴定EBV编码的RNA（EBER）和microRNA-191。在20 μL的反应体系中，研究者实现了低至1×10-8 ng（0.99 pM）的分析检测限（LOD），相当于每个反应1.2个拷贝，与PCR相当，并优于现有的基于CRISPR的检测方法。
结论：该方法具有每反应单拷贝的检测限和单碱基判别能力，灵敏度可达0.1%，40 min内完成整个诊断过程。该方法在T-ALL/LBL治疗的早期筛查、护理点应用和治疗方案指导等方面具有重要意义。
Poster 摘要号：P1338
标题：Comparable outcomes after haploidentical and HLA-matched allogeneic stem cell transplantation in patients with myeloid sarcoma
中文标题：HLA相合与半相合的异基因造血干细胞移植在髓系肉瘤患者中的疗效比较
第一作者：孙杰
通讯作者：张晓辉
背景：髓系肉瘤（MS）是一种由髓系细胞增殖形成的罕见肿瘤，预后较差。异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）可能为改善MS患者的生存提供潜在策略。然而，关于半相合造血干细胞移植（haplo-HSCT）与HLA相合HSCT在MS患者中比较的研究非常有限。
目的：比较髓系肉瘤患者中HLA相合与半相合异基因造血干细胞移植的临床结局。
方法：在这项回顾性研究中，研究者收集了2007年1月至2023年12月在国内3家移植中心接受异基因造血干细胞移植治疗的76例髓系肉瘤患者的数据。连续变量采用平均值和中位数进行描述，分类变量用百分比描述。利用Kaplan-Meier方法分析总体生存率。通过单因素Cox回归分析影响预后的因素，并将P<0.1纳入多因素分析。在多因素分析模型中，p<0.05具有统计学意义。使用SPSS 24.0版本完成统计分析。
结果：研究者比较了在MS患者中进行全相合（n = 31）或半相合（n = 45）异基因造血干细胞移植的临床特征及结局。MS诊断的中位年龄为37岁（范围16–56岁）。其中38名患者是原发性孤立性MS，32名患者同时患有AML和MS，6名患者既往有AML病史。半相合和全合异基因造血干细胞移植的中性粒细胞植入中位时间分别为12天和11天（p = 0.23）。在MS患者中，半相合异基因造血干细胞移植的OS和PFS优于全相合移植（p = 0.043，p = 0.031），两组间的急性移植物抗宿主病（aGVHD）的发生率分别为45.7%（95%CI，31.2–65.8%）和20.5%（95%CI，14.8–36.2%），慢性GVHD的发生率分别为28.6%（95%CI，19.8–40.1%）和18.7%（95%CI，11.3–32.9%），均没有显著差异。在多因素cox分析中，Haplo-HSCT与较长的OS和PFS有关。
结论：选择haplo-HSCT的MS患者临床结局良好，表明半相合供者可以作为MS患者移植的选择之一。
Poster 摘要号：P1357
标题：Low-dose defibrotide treatment for high-risk transplantassociated thrombotic microangiopathy after allogeneic haematopoietic stem cell transplantation: A prospective observational study
中文标题：低剂量去纤苷治疗高危移植相关血栓性微血管病：一项前瞻性观察研究
第一作者：付海霞
通讯作者：张晓辉
背景：移植相关微血管病（TA-TMA）是异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）的一种危及生命的并发症，allo-HSCT后发生率约15-30%，多器官功能障碍的重症患者死亡率高达60-90%。去纤肽（DF）可通过其抗凝、溶栓、抗炎和抗缺血特性作用于内皮细胞（EC）。研究发现，DF 6.25mg/kg，每6小时静脉注射一次（总量25mg/kg/d），持续≥21天，可有效治疗TA-TMA。但研究病例数有限，且缺乏前瞻性研究证据。此外，DF的高成本和难以获得性，也是限制其应用的重要原因。
目的：该研究的目的是探讨低剂量DF治疗allo-HSCT后TA-TMA的安全性和有效性。
方法：这是一项前瞻观察性研究。所有在该研究中心诊断allo-HSCT后高危TA-TMA且接受低剂量DF（6.25 mg/kg，每12小时一次（12.5 mg/kg/d））的患者均纳入研究，患者接受DF治疗直到TA-TMA缓解。入组标准：根据Jodele等的研究，在allo-HSCT受者中诊断TA-TMA：有TMA的组织学证据或同时存在≥5个临床诊断标准。如果患者诊断TA-TMA且满足以下3个标准中的≥2个，则将其归为高危TA TMA：①随机尿蛋白/肌酐比值（rUPCR）≥2 mg/mg；②sC5b-9升高（≥244 ng/mL）；③多器官功能障碍综合征（MODS）的临床证据。排除标准为严重活动性出血。
结果：2018年8月1日至2023年11月31日，共有32名患者纳入研究，其中包括21名男性和11名女性。中位年龄为36岁（1-63岁）。大多数患者（n=25，78.1%）接受了单倍型allo-HSCT，5名患者（15.6%）接受了同胞全相合allo-HSCT，2名患者（6.3%）接受非亲缘全相合allo-HSCT。大多数患者（28/32，87.5%）因恶性血液病接受allo-HSCT，其他4例（12.5%）因严重
结论：对于高危TA-TMA患者，使用低剂量DF可能是一种潜在的安全有效的治疗方法。然而，有待于大队列前瞻性研究的进一步证实。
Poster 摘要号：P1623
标题：Sympathetic nerves regulate megakaryocyte function through calcium signaling in immune thrombocytopenia
中文标题：交感神经通过钙信号调节ITP患者巨核细胞功能
第一作者：李梦琳
通讯作者：张晓辉
背景：免疫性血小板减少症（ITP）是一种
方法：采用
结果：ITP患者血浆NE和EPI浓度显著低于对照组。NE和EPI显著增强了巨核细胞的迁移、粘附和产生血小板的巨核细胞数量。ITP巨核细胞中α2a和α2b肾上腺素能受体表达水平升高。NE和EPI刺激后胞内钙信号显著增加，与ITP相比，对照的时间-荧光强度曲线出现更高的峰值。
结论：ITP患者骨髓交感神经受损，神经递质分泌减少。NE/EPI可以促进巨核细胞的迁移和黏附以及血小板的产生。交感神经可能通过α2-AR调控SOCE相关分子调控钙信号，进而调控巨核细胞功能。
Poster 摘要号：P1627
标题：Disfunction of bone marrow neutrophils and study of the therapeutic mechanisms of JAK1 inhibitors in ITP
中文标题：骨髓中中性粒细胞功能障碍及JAK1抑制剂在ITP中的治疗机制研究
第一作者：渠清源
通讯作者：张晓辉
目的：绘制中性粒细胞在免疫性血小板减少症（ITP）患者中特异性图谱，分析 ITP患者中性粒细胞相关骨髓微环境特征性改变，初步阐明中性粒细胞异常与血小板减少的关系，通过体内外实验探索 JAK1 抑制剂对中性粒细胞的作用，及其纠正中性粒细胞异常对血小板产生影响分子机制。
方法：收集于2023年3月至2023年12月就诊的ITP患者及健康对照的骨髓血样本，采用单细胞测序、4D label free蛋白组学和Olink蛋白组学技术等，首次探究ITP患者骨髓中性粒细胞发育和异质性等特征性改变。分离健康对照及ITP患者骨髓中性粒细胞，流式细胞术检测细胞表面分子表达，TAXIScan细胞迁移可视化和Transwell实验观察中性粒细胞趋化性改变，体外分选健康对照 CD34+造血干细胞并诱导分化为巨核细胞，建立中性粒细胞和巨核细胞共培养体系，流式细胞术检测中性粒细胞对巨核细胞血小板产生的作用，确定中性粒细胞异常与血小板减少的直接关联。通过构建被动型 ITP小鼠模型，采用组织切片病理、流式细胞术和免疫荧光染色等，分析中性粒细胞体内对巨核细胞产板的影响。
结果：ITP 外周血及骨髓中性粒细胞比例及分化异常，ITP外周血成熟（分叶核）中性粒细胞占比高于健康对照，激素治疗可以显著增加外周血分叶核中性粒细胞占比。单细胞测序结果发现，ITP和健康对照中性粒细胞在分化成熟方面存在显著的差异，ITP患者干扰素反应性中性粒细胞亚群即ISG15high 中性粒细胞亚群明显增多，中性粒细胞，特别是高表达ISG15的中性粒细胞亚群 I 型干扰素通路激活。蛋白质组学检测证实，ITP患者中性粒细胞差异表达蛋白及磷酸化蛋白中脱颗粒相关的通路改变最为明显，ITP患者骨髓血中性粒细胞趋化因子表达显著降低，中性粒细胞趋化功能异常。体内体外实验均证明中性粒细胞直接影响巨核细胞血小板产生。
结论：中性粒细胞通过直接接触参与血小板形成过程，ITP患者骨髓中中性粒细胞趋化因子表达水平降低，中性粒细胞趋化功能受损。Ⅰ型干扰素途径的激活与中性粒细胞趋化因子功能受损显著相关。乌帕替尼可以抑制激活的Ⅰ型干扰素通路，恢复中性粒细胞表面分子的表达，纠正受损的趋化功能，调节Th1/Th2平衡。本研究为开发能够限制自身免疫性疾病发展的中性粒细胞靶向治疗提供了理论基础。
张晓辉 教授
主任医师 二级教授 博士/后导师
北京大学人民医院血液科、北京大学血液病研究所副所长
国家血液系统疾病临床医学研究中心副主任兼办公室主任
中华医学会血液学分会委员会 副主任委员、造血干细胞应用学组组长
中国免疫学会血液免疫分会委员会副主任委员
北京癌症防治学会血液工作委员会主任委员兼理事长
主持国家科技重大专项、国家自然科学基金重点项目、首都卫生发展科研重点项目等
课题负责人主持：国家科技重大专项、国家自然科学基金重点项目、首都卫生发展科研重点项目等；牵头/执笔中国专家指南/共识28部，主编血液领域专著5部，国家发明专利申请/授权21项，第一/通讯发表SCI 论文129篇Nat. Immunol, J Hematol Oncol, Lancet Heamatol, Blood, Nat. Commun, Leukemia,等, 获“国之名医·卓越建树”称号；以第一完成人获：华夏医学科技奖一等奖；中华医学科技奖二等奖；以共同完成人获：国家科技进步二等奖（2项）
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