梅毒是由
1. 对象与方法
1.1 研究对象
实验组32例梅毒血清固定患者均来自2007－2011年本所门诊，其中男12例，女20例;年龄19~52(29.6±7.9)岁;一期梅毒3例，二期梅毒19例，潜伏梅毒10例;血清固定时间持续1.5~10(3.8±2.4)年;其中RPR1:1者6例，RPR1:2者10例，RPR1:4者15例，RPR1:8者1例。梅毒血清固定诊断标准:血清固定前均已接受驱梅治疗，无临床症状或治疗后临床症状消失，并经脑脊液常规、生化及RPR等检测排除
剔除标准:孕妇、追踪期间有不洁性生活史者、有其他免疫系统疾病患者、严重系统性疾病、合并感染其他性病等。对照组为在本所门诊随机选取的15例未治疗梅毒患者(HIV阴性，一期梅毒2例，二期梅毒9例，潜伏梅毒4例)及血清RPR，TPPA和HIV均阴性的健康志愿者11例。各组年龄、性别等构成比相匹配。
1.2 方法
抽取研究者外周血标本5mL放入EDTA-K2抗凝管即时送检。对所有标本进行RPR，TPPA，HIV及肝肾功能等检测。除健康者外余均进行脑脊液常规、生化及RPR检查。使用流式细胞仪检测上述各组外周血CD4+，CD8+，Th1，Th2和NK等细胞水平。所有实验方法的操作规程参照试剂及仪器的说明书严格进行。具体操作步骤:在绝对计数管底部加20μL荧光素单克隆抗体(CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC)。
取EDTA抗凝静脉血50μL，用逆向加样法向绝对计数管底部加入。盖上管帽，轻轻震荡混匀，于室温(18~25℃)避光15min染色。向管内加入450μL溶血液，盖上管帽，轻轻震荡混匀，于室温(18~25℃)反应15min后，上样BDFACSCalibur流式细胞仪分析。应用CellQuest软件分析。
1.3 结果
判定方法细胞荧光强度:在细胞分布的直方图上，细胞巅峰所处荧光道数。阳性细胞百分比:在检测细胞总数中，相应CD阳性胞所占的百分比。
1.4 统计学处理
应用Excel2003处理数据，使用SPSS17.0软件进行统计分析，组间年龄、性别比较使用χ2检验，实验室数据以(x±s)表示，组间实验室数据比较使用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
检测结果显示，血清固定组CD4+T细胞(33.73±8.91)%，Th1细胞(15.96±5.31)%和NK细胞(15.03±4.98)%分别与健康组CD4+T细胞(46.63±10.34)%，Th1细胞(26.43±13.65)%和NK细胞(22.25±6.11)%比较明显减少，差异均有统计学意义(t=3.9776，－2.4803，3.9139;P均<0.05);血清固定组CD8+T细胞(43.49±7.38)%和Th2(2.97±0.63)%与健康组CD8+T细胞(36.75±8.84)%和Th2(2.41±0.50)%比较，明显增多，差异有统计学意义(t=2.4846，2.6664;P均<0.05);血清固定组CD4+/CD8+(0.77±0.35)和Th1/Th2(5.27±2.42)与健康组CD4+/CD8+(1.31±0.37)和Th1/Th2(10.24±4.89)比较，比值降低，差异均有统计学意义(t=4.3524，－3.2374;P均<0.01)。
血清固定组CD4+T细胞和Th1细胞与未治疗梅毒患者组CD4+T细胞(43.23±7.96)%和Th1细胞(19.61±3.71)%比较明显减少，差异均有统计学意义(t=3.5197，2.3957;P<0.01，0.05);血清固定组CD8+T细胞、Th2细胞和NK细胞与未治疗梅毒组CD8+T细胞(42.97±6.49)%，Th2细胞(2.81±0.44)%和NK细胞(17.25±4.63)%比较，差异无统计学意义;CD4+/CD8+和Th1/Th2比值比较，未治疗梅毒患者组CD4+/CD8+(1.01±0.42)和Th1/Th2(6.98±3.20)比值均下降，差异均有统计学意义(t=2.0552，2.0337;P均<0.05)。
未治疗梅毒患者组CD8+和Th2与健康组CD8+和Th2相比明显增高，差异均有统计学意义(t=2.0731，2.1626;P均<0.05)。未治疗梅毒患者组NK细胞与健康组NK细胞相比降低，差异有统计学意义(t=2.3778，P<0.05)。未治疗梅毒患者组CD4+T细胞、Th1细胞、CD4+/CD8+比值和Th1/Th2比值与健康组比较，差异均无统计学意义(t=0.9487，－1.614，1.8897，2.0572;P均＞0.05)。
3. 讨论
少数梅毒患者经驱梅治疗临床症状消失后，RPR滴度下降到一定程度(一般≤1:8)即不再下降，而长期维持阳性(甚至终生)，这种现象称为血清固定(seroresistance)。血清固定的发生率从3.8%~40.5%不等，而且随病程延长而增多。
血清固定的可能原因主要有:①早期梅毒治疗不选择首选药物、药物治疗量不足、治疗不规则;②梅毒的病期、类型、开始治疗的时间早晚;③复发、再感染或体内仍存在深在的病灶;④生物学假阳性;⑤机体的细胞免疫功能受到抑制等。
T淋巴细胞在胸腺的作用下，分化为CD4+和CD8+亚群。CD4+T细胞能分泌多种细胞因子，具有特定的免疫调节和杀伤功能，在机体抗梅毒螺旋体感染的过程中发挥着重要作用。CD4+T细胞主要是Th细胞，可分化为Th1，Th2细胞。Th1主要介导细胞免疫反应，参与并促进细胞免疫应答，诱导巨噬细胞活化，在清除细胞内微生物方面发挥重要作用。Th2主要介导体液免疫反应。
同时抑制Thl细胞分化增殖。Th1和Th2之间相互调节制约，维持细胞免疫和体液免疫的平衡。CD8+T细胞亚群主要为免疫抑制性T细胞(Ts)。Ts在抗螺旋体感染的免疫功能主要是抑制机体免疫反应，同时抑制自身反应性CD4+T细胞活性及梅毒螺旋体制动抗体的产生，降低机体抵抗和清除梅毒螺旋体感染的能力。Ts增高表明细胞免疫功能受到抑制。
梅毒患者的免疫状况，早期以Th1型细胞因子为主，Th1占优势，随着病程迁延，其表达逐渐降低，Th2型免疫应答被激活，进一步抑制Th1型免疫反应。Th1型细胞因子过早减少或消失使一部分病原体逃过机体的细胞免疫，致感染进入慢性阶段。Podwinska等研究显示，在梅毒损坏恢复的过程中，淋巴细胞分泌IL-2，IFN，TNF和MIF的能力是逐渐增加的，在梅毒由早期向晚期发展的过程中，Th1型细胞因子逐渐减少，Th2型细胞因子逐渐增加。Th1/Th2比值降低，提示发生Th1/Th2平衡向Th2型转向，机体细胞免疫防御能力降低，外周血中Th1/Th2细胞分泌的细胞因子水平随梅毒病程的进展呈动态变化。
本实验结果发现，血清固定者与健康者相比较，出现CD4+T细胞、NK细胞数量减少，CD8+T细胞增多，CD4+/CD8+比值和Th1/Th2比值下降，显示细胞免疫功能受到抑制。结果与Podwinska、包图雅等一致。而与未治疗梅毒患者组比较，出现CD4+T细胞、Th1细胞减少，CD4+/CD8+和Th1/Th2比值下降，亦显示细胞免疫功能受的抑制。梁平等认为CD4+/CD8+则是反映机体免疫平衡状况的敏感指标，比CD4+T细胞能更好的反映机体细胞免疫功能。未治疗梅毒患者组与健康者比较，仅CD8+T细胞和Th2细胞增高，NK细胞减少，而CD4+/CD8+和Th1/Th2比值没有显著性下降，显示未治梅毒患者细胞免疫功能仅受到一定程度的影响。
本实验进一步证实了梅毒血清固定患者细胞免疫发生Th1/Th2比值下降，Th1/Th2平衡向Th2型转向，细胞免疫防御能力降低，而且可能在血清固定前的梅毒阶段就已经出现不同程度的免疫抑制。梅毒患者随着病期越长梅毒螺旋体感染机体越广泛、越深入组织，深在部位药物难以渗入或形成肉芽组织包裹，可引起梅毒螺旋体长期潜伏。因此推测，抗体持续阳性可能是由于患者细胞免疫功能受抑制，机体不能彻底清除体内深部组织的病原体或病原体的尸体引起。所以梅毒血清固定的发生率与病期呈正相关。因此在血清固定的治疗上，有采用能使肉芽肿溶解吸收的
NK细胞不需要特异性抗体参与或无需靶细胞上的MHCⅠ和MHCⅡ类分子表达即可直接杀伤靶细胞，体现了机体的一般免疫功能。本组实验结果显示，血清固定组和未治疗梅毒患者组外周血NK细胞水平均低于健康对照组(P<0.05)，与报道一致，而且血清固定组降低更显著，支持血清固定患者免疫功能受损这一推测，而且NK细胞的减少随着梅毒向血清固定的发展而明显，与Th1向Th2漂移随梅毒病程的进展而呈动态变化的表现一致。Jensen等观察到在二期和隐性梅毒患者体内NK细胞活性受到抑制。同时梅毒患者血清含有与免疫球蛋白碎片有关的免疫抑制因子，这些免疫抑制因子可降低健康人群的NK细胞活性。
综上所述，血清固定患者由于存在免疫不平衡和细胞免疫抑制，对于病期较长、病原体感染部位较深的患者，有可能对梅毒螺旋体的清除不彻底，从而造成血清固定。因此在治疗血清固定患者时，应认真排除神经、心血管、内脏等深在梅毒，优先考虑使用能深入到机体深在组织的药物如头孢曲松、
(本网站所有内容，凡注明来源为“医脉通”，版权均归医脉通所有，未经授权，任何媒体、网站或个人不得转载，否则将追究法律责任，授权转载时须注明“来源：医脉通”。本网注明来源为其他媒体的内容为转载，转载仅作观点分享，版权归原作者所有，如有侵犯版权，请及时联系我们。)
