细胞外囊泡(EVs) 是由细胞来源的脂质双层膜包裹的小囊泡，分为几种亚型，包括外泌体 (EXOs) 和微囊泡 (MVs)。天然EVs具有治疗疾病的内在潜力。然而，天然EVs在癌症治疗中的应用受到其有限的肿瘤杀伤功效和靶向特异性不足的阻碍。为了克服这些局限性，可以对天然EVs进行改造，以提高其肿瘤靶向能力和细胞毒性潜力。然而，将靶向分子或药物负载到细胞外囊泡上的过程面临着诸多挑战。负载过程通常技术复杂、效率低下，并且存在破坏细胞外囊泡结构完整性的潜在风险。这些局限性阻碍了它们在临床环境中的广泛应用。

从工程化的靶向癌症的杀伤细胞（例如嵌合抗原受体(CAR)-T和CAR-NK）中提取EVs是生产工程化EVs的重要替代策略。例如，CAR-T细胞释放表面带有CAR的外泌体，而为这些载有CAR的外泌体配备多种细胞毒性分子，使其能够作为有效的肿瘤靶向剂发挥作用。T细胞衍生的EVs的肿瘤杀伤功效归因于致死性物质，例如颗粒酶、溶酶体酶和穿孔素。因此，源自CAR-T细胞的EVs有可能成为高效的癌症靶细胞清除剂。然而CAR-T细胞的生产是一个复杂的过程，需要先进的培养技术以及大量的时间和资源投入。CAR-T-EV疗法还存在诱发细胞因子释放综合征（CRS）的风险，这是一种由免疫细胞激活引发的潜在危及生命的炎症反应。

利用永生化非杀伤细胞（例如HEK293细胞）生产EVs具有诸多优势，包括产量高、生产流程简化且标准化、安全性更高、免疫原性降低以及无CRS风险。HEK293细胞系因其高转染效率、快速生长和高EV产量而特别适合EV的生产。此外，HEK293衍生的外泌体具有较低的体内毒性和免疫原性。鉴于这些优势，利用永生化非杀伤细胞构建具有强大肿瘤靶向和杀伤能力的工程化EVs有望规避CAR-T-EV面临的挑战。然而，源自永生化非杀伤细胞的EVs通常需要复杂的修饰才能实现足够的肿瘤靶向性和抗肿瘤活性。因此，开发更直接有效的EVs修饰方法势在必行。

该研究提供了一种简单有效的策略，可以从工程化的非杀伤性细胞中生成治疗性细胞外囊泡。该研究证明，该策略可用于从表达靶向模块的工程化非杀伤性细胞中生成具有高癌症靶向性和杀伤能力的工程化细胞外囊泡。尽管这些细胞外囊泡源自非杀伤性细胞，但它们能够通过一种未被充分重视的杀伤机制（包括内吞和靶抗原的耗竭）来杀死靶细胞。该研究还表明，使用嵌合CD8-CD63/CD81跨膜结构域在细胞外囊泡表面表达靶向模块可抑制干扰素应答，从而进一步增强抗肿瘤能力。