套细胞淋巴瘤（MCL）是B细胞淋巴瘤的一种亚型，常伴有Cyclin D1过表达。BTK抑制剂和CD19-CAR-T细胞疗法对MCL有效，但复发率高，主要原因包括治疗耐药、免疫逃逸以及过继性细胞疗法失败。临床观察提示，在CAR-T治疗前使用可逆性BTK抑制剂PBN（例如匹妥布替尼）桥接，与CAR-T细胞扩增增强、耗竭减少和良好反应率相关，但缺乏直接的临床前证据支持。

因此MD安德森癌症中心王鲁华教授团队开展体外实验和动物模型，探究了在CAR-T细胞制备中及治疗中引入BTK抑制剂是否能重塑T细胞的干细胞性（stemness）和记忆相关转录程序，并评估了这种调节是否能增强CAR-T细胞的代谢适应性、持久性和功能，并减轻肿瘤微环境（TME）驱动的免疫功能障碍。

点击文字下载原文Reversible and irreversible BTK inhibition promotes stem-like functional multipotency, persistence, and antitumor efficacy of CD19-directed CAR T cells in mantle cell lymphoma、、.pdf

BN促进患者体内原始T细胞和干性样记忆T细胞（TscM）表型

数据来源：重新分析MCL患者接受PBN治疗前后的单细胞RNA测序（scRNA-seq）数据。

主要结果：PBN治疗后，患者体内CD8+初始T细胞和早期活化T细胞的比例增加，总T细胞丰度升高。与T细胞干性相关的关键标志物（如CD62L, IL7R）的转录水平显著上调。

结论：PBN治疗能促进干性样记忆T细胞（TscM）表型并增加其频率，这类细胞因具有卓越的持久性和对耗竭的低敏感性，有助于对抗CAR-T和抗体疗法的失效。

BTK抑制剂调节的CAR-T细胞（KI-调制CAR-T）表现出更幼稚、更干性的表型

实验方法：在CAR-T细胞制备的激活、转导和早期扩增阶段，分别加入PBN或IBN。

表型特征：

分子层面：RT-qPCR证实，PBN暴露上调了与记忆和干性相关的转录程序，包括TCF7, LEF1, IL7R, BACH2, CD62L 的表达显著增加。

KI-调制CAR-T细胞表现出增强的代谢适应性

代谢特征：PBN暴露降低了CAR-T细胞的葡萄糖摄取。显著提升了线粒体呼吸能力，包括基础耗氧率、ATP偶联耗氧率和储备耗氧率均增加。

结论：这表明CAR-T细胞的代谢从糖酵解向氧化磷酸化（OXPHOS）转变，这是TscM细胞典型的代谢适应，有利于细胞长期存活和功能维持。IBN也观察到类似效果。

KI-调制CAR-T细胞在体外表现出增强的效应功能和细胞毒活性

效应功能：与靶细胞共培养时，KI-调制CAR-T细胞仍能诱导IFN-γ和TNF-α的靶向分泌，且额外加入PBN可进一步增强此反应。

细胞毒活性：

对TME的调节：在模拟肿瘤微环境的共培养模型中，PBN能够显著降低由MCL肿瘤细胞诱导的IL-10（一种免疫抑制相关细胞因子）分泌，提示其具有逆转免疫抑制微环境的潜力。

动物模型证实PBN显著增强CAR-T细胞的体内抗肿瘤疗效

模型建立：使用免疫缺陷小鼠（NSG）建立了MCL的细胞系来源异种移植（CDX）模型和患者来源异种移植（PDX）模型，后者特别选用了对CAR-T治疗复发的患者样本。

治疗方案：在肿瘤接种后，给予KI-调制CAR-T细胞，并联合使用非细胞毒性剂量的PBN（25 mg/kg）。

主要结果：

克服耐药：即使是在携带ATM和TP53突变（与免疫逃逸和CAR-T耐药相关）的PDX模型中，PBN联合治疗依然有效，表明该策略有望克服MCL对CAR-T疗法的耐药性。

BTK 抑制的离体药理学预处理促进了 CD19-CAR T 细胞中的初始样、干细胞样记忆表型，并增强了代谢适应性。PBN 治疗前后 MCL 患者样本中 T 细胞亚群的比例来自可用 scRNA-seq 数据集的免疫分析。计算 T 细胞亚群的 T 细胞绝对计数，并以堆叠条形图表示。颜色代表 T 细胞功能状态。B 从 scRNA-seq 数据中鉴定 MCL 患者 T 细胞中干细胞样记忆 T 细胞标志物 (SELL、IL7R) 和持续相关分子 LTB 的差异表达基因，并在图中可视化。点大小表示差异表达的幅度（对数倍数变化，PBN后vs. PBN前），而点颜色表示统计学显著性 (-log10 FDR)。C 通过流式细胞术定量 PBN 加达沙替尼调节的 CAR T 细胞中初始和干细胞记忆细胞亚群的相对百分比。D 通过 RT-qPCR 分析定量上述 CAR T 细胞中编码记忆和干性调节因子或标记物（TCF7、LEF1、IL7R、BACH2和CD62L）的基因转录水平，并呈现相对于其常规对应物的倍数变化。使用 2-NBDG 掺入的流式细胞术评估PBN（0.2和1 μM）处理的常规 CD19-CAR T 细胞的 E 葡萄糖摄取。F 使用 Seahorse XF96 代谢通量分析仪测量传统 CD19-CAR T 细胞的耗氧量。 使用BD OptEIA Human IFN-γ和 TNF ELISA Kit 定量测定与 KI 调节的 CAR T 细胞共培养上清液中IFN-γ和TNF-α的 G 靶标特异性分泌。分别在 JeKo-BTK KD 和 Maver-1 细胞系中评价存在或不存在 PBN 时 KI 调节的 CAR T 细胞的 H 杀肿瘤活性。I 在 CAR T 细胞治疗后复发患者的原代细胞中，评价了存在或不存在 PBN 时常规或 KI 调节的 CD19-CAR T 细胞的杀肿瘤活性。

亚细胞毒性 BTK抑制可增强 MCL中的抗原依赖性效应子功能，并增强 CD19定向 CAR T细胞的肿瘤排斥反应。在 MCL CDX和 PDX模型中评价了 BTKi对 CD-19 CAR T介导的抗 MCL疗效的影响。将表达荧光素酶的 Maver-1细胞植入 NSG小鼠建立 CDX模型。用 KI调节的 CD19-CAR T细胞重建特定的荷瘤小鼠，并用 PBN(25 mg/kg)处理。通过生物发光成像(BLI)监测肿瘤进展，通过测量平均辐照度并纵向绘图定量肿瘤随时间的生长。B使用 Kaplan-Meier曲线(GraphPad Prism 10，Dotmatics)评估 CDX模型中给药小鼠的总生存期，通过本研究中所有模型的对数秩(Mantel-Cox)检验确定统计学显著性。C终点时，使用流式细胞术对解剖的小鼠组织（血液、脾脏、肝脏和骨髓）中的总 T细胞进行计数，以相对计数表示。D通过将 CAR T细胞治疗后复发的 MCL患者的表达 CD19的肿瘤细胞（1× 106/小鼠）植入 NSG小鼠，建立 PDX模型。指定的荷瘤小鼠用 KI调节的 CD19-CAR T细胞重建，效靶比分别为1:1和2:1，随后用 PBN(25 mg/kg)处理。通过血浆β-2微球蛋白(B2M)定量监测肿瘤进展。E,G如上所述，使用 Kaplan-Meier曲线评估图 D和 F中给药小鼠的总生存期。F如上所述，从 CAR T细胞治疗后复发且携带 ATM和 TP53突变，随后接受 PBN(25 mg/kg)治疗的患者中建立 PDX模型。如上所述监测肿瘤生长。

核心结论：可逆和不可逆BTK抑制剂均能在CD19-CAR-T细胞中促进初始和干性样T细胞特性，同时增强其代谢适应性和持久性。

作用机制：BTK抑制（特别是PBN）通过适度减弱TCR/CAR信号，引导CAR-T细胞向代谢更高效、耗竭更少的记忆表型分化。

临床转化潜力：

参考文献

Yao, Y., Fei, Y., Yan, F. et al. Reversible and irreversible BTK inhibition promotes stem-like functional multipotency, persistence, and antitumor efficacy of CD19-directed CAR T cells in mantle cell lymphoma. Leukemia (2026). https://doi.org/10.1038/s41375-026-03032-y

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