在代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）引起的肝细胞癌（HCC）（MASH-HCC）中常见免疫抑制性肿瘤微环境。尽管免疫细胞代谢会影响效应功能，但肿瘤代谢对免疫原性的影响尚不完全清楚。ATP柠檬酸裂解酶（ACLY）作为连接代谢与脂质合成的关键酶，可将柠檬酸转化为乙酰辅酶A和草酰乙酸，在肿瘤细胞合成代谢、表观遗传调控中发挥重要作用。ACLY在HCC中高表达，其表达降低与HCC患者生存率改善有关，但ACLY在MASH-HCC中的作用尚不明确。近期，Nature期刊发表的一项研究，采用MASH-HCC小鼠模型揭示了ACLY是调控MASH-HCC肿瘤免疫相互作用的关键因子，为MASH-HCC的治疗提供了新思路。

研究者采用对雄性C57BL/6J小鼠注射二乙基亚硝胺（DEN），自8周开始分别饲喂对照饲料（control-DEN）或高脂/高果糖西式饮食（WD-DEN）持续28周的方法构建MASH-HCC模型。在WD-DEN模型基础上，研究者将28周时血浆AFP水平相当的小鼠分别注射表达YFP（野生型[WT]）或Cre重组酶（Acly敲除[KO]）的肝细胞靶向腺相关病毒8（AAV8）-TTR载体，以诱导肝细胞特异性Acly缺失。病理分析显示，Acly-KO小鼠表面肿瘤数量和肿瘤表面积均显著低于野生型对照组；Acly敲除小鼠肿瘤性病变脂肪变性程度降低。表明在MASH-HCC模型中，特异性Acly敲除可减少肿瘤数量、大小、严重程度和脂质含量。

研究者对原代小鼠肝细胞进行表型筛选，以明确影响脂肪酸和胆固醇合成的化合物。最终筛选出EVT0185，其可强效抑制脂肪从头生成（100 µM 时抑制率达84%，半数抑制浓度[IC50]= 0.46 µM），并可转化为EVT0185-CoA。质谱分析表明，只有表达SLC27A2的细胞，EVT0185才能转化为辅酶A硫酯形式。提示，EVT0185在肝脏和肿瘤中通过SLC27A2转化为CoA硫酯，但在MASH-HCC的免疫细胞中则不会发生转化。

在无细胞实验中，EVT0185-CoA可抑制重组人ACLY (hACLY)活性，并且与辅酶A呈竞争性抑制。通过单颗粒冷冻电镜（cryo-EM）分析显示，EVT0185-CoA可直接与ACLY的CoA结合位点相互作用。

此外，研究者还发现，EVT0185具有非ACLY依赖性抑制作用。研究者评估了野生型（WT）和Acly敲除（Acly-KO）小鼠肝细胞中乳酸掺入脂肪酸和甾醇的情况，并将结果与等摩尔剂量的贝培多酸进行比较。结果发现，在野生型肝细胞中，EVT0185 对乳酸和乙酸合成脂肪酸和胆固醇的抑制作用强于贝培多酸，且在Acly敲除细胞中差异更为显著，提示可能存在其他靶点。无细胞实验表明，与贝培多酸不同，EVT0185-CoA 抑制并非激活含 AMPKβ1 的复合物，而且对ACC1、ACC2 和 ACSS2有抑制。另外，EVT0185对人（Hep3B）和小鼠（Hepa1-6）肝癌细胞系的克隆形成能力抑制作用也强于贝培多酸。表明EVT0185 和贝培多酸具有不同的机制，支持EVT0185用于HCC。

进一步评估EVT0185在体内的疗效发现，与对照组相比，口服EVT0185可在1小时内降低呼吸交换率，且该作用可持续长达5小时，表明其能快速且持续地抑制脂肪生成和/或促进脂肪酸氧化。而且，口服EVT0185抑制肝脏中14C-葡萄糖的脂肪生成呈剂量依赖式，在10 mg/kg剂量下呈现抑制趋势（-18%），在30 mg/kg剂量下（-56%，P=0.02）和60 mg/kg剂量下（-69%，P=0.005）则显著降低肝脏中14C-葡萄糖的脂肪生成， 表明其具有良好的口服生物利用度。

随后，研究者在三种小鼠模型中评估了EVT0185的疗效。结果发现，在WD-DEN模型中，EVT0185可降低肿瘤负荷，而贝培多酸疗效有限。与Acly-KO小鼠类似，EVT0185也可降低肿瘤表面积和脂质积累。在WD-CCl₄预防模型中，小鼠在12周时出现MASH和纤维化，但尚未形成肿瘤，EVT0185可抑制肿瘤发生发展。在不含DEN或CCl₄的18个月WD模型中，AFP水平升高的小鼠被随机分为载体组和EVT0185（100 mg/kg）组，治疗4周后，EVT0185治疗小鼠肿瘤数量明显减少。从19周开始对已形成肿瘤的WD-CCl₄小鼠进行治疗，结果显示，EVT0185在降低肿瘤负荷和结节大小方面与索拉非尼和仑伐替尼相当，并且与仑伐替尼联合使用时，8%的小鼠达到完全肿瘤缓解。在WD-CCl4模型中，将EVT0185与抗PD-L1和VEGFR单抗联合使用可显著降低肿瘤负荷和肿瘤数量，克服了免疫单药疗效有限的缺点。

为探究Acly基因敲除（Acly-KO）小鼠肿瘤负荷降低的机制，研究者对野生型（WT，n=9）和Acly-KO（n=12）小鼠在AAV注射后4周（早期）和8周（晚期）两个时间点的肝脏肿瘤进行批量RNA测序。结果显示，两个时间点的Acly表达均显著降低，但晚期降低的程度较小。空间转录组分析发现，Acly-KO和EVT0185处理的小鼠肿瘤中B细胞数量选择性增加（主要为浆细胞），而T细胞、巨噬细胞或自然杀伤T细胞的数量无增加，而且CXCL13水平升高。单细胞蛋白质谱分析亦发现Acly-KO小鼠肿瘤周边B细胞数量增加，而T细胞或其他免疫细胞群增加不显著，伴脂滴相关蛋白（PLIN2）水平降低和CXCL13蛋白表达增加。对肿瘤B细胞浸润进行详细分析发现，三级淋巴系统（TLS）的B细胞聚集主要见于Acly-KO小鼠。单细胞RNA测序（scRNA-seq）显示，EVT0185处理的小鼠B细胞中补体激活和细胞毒性通路上调。上述数据提示，肿瘤ACLY的减少与趋化因子CXCL13、肿瘤浸润B细胞和三级淋巴结构的增加相关。

在MASH-HCC小鼠中，进一步证实抑制ACLY引起的肿瘤负荷减少需要B细胞的参与。同小鼠模型相似，在人MASH-HCC中，ACLY表达与B细胞标志物表达呈负相关，ACLY水平越高，B细胞浸润越少；在ACLY高表达的肿瘤中，CXCL13表达显著降低，而在ACLY低表达的肿瘤中，CXCL13表达升高。