乙肝病毒（Hepatitis B virus，HBV）是世界范围内一种常见的血液传播病原体，可导致病毒性肝炎、
一、研究方法
研究收集了18名HBV携带者、24名OBI献血者和20名健康献血者的粪便样本。通过使用16S测序，评估OBI献血者粪便样本中差异肠道菌群组成是否可能诱导免疫反应。
二、研究结果
1. 参与者特征
所有研究对象均为男性，体质指数（body mass index ，BMI）、年龄、饮酒或吸烟比例，血小板（platelets，PLT）、白细胞（white blood cells，WBC）、淋巴细胞、中性粒细胞和单核细胞计数均无差异。天冬氨酸转氨酶（aspartate transaminase，AST）在三组间无差异，而
为了研究这三组的免疫状态，用ELISA法定量检测PBMCs培养上清液中IFN-γ和IL-17A细胞因子的分泌情况（图1A和B）。结果显示，OBI组分泌的IFN-γ和IL-17A水平高于健康人群或HBV携带者。用HBV核心肽刺激后，ELISpot检测发现三组间特异性IFN-γ和IL-17A分泌T细胞应答也有明显差异，OBI组的IFN-γ和IL-17A分泌T细胞应答高于健康人群或HBV携带者（图1C至E）。
图1 三组参与者免疫状态比较
2. 肠道菌群分类分布
三组间的α多样性指数均无显著差异。虽然OBI组的ACE和Chao1指数评分高于其他两组，但这种差异并未达到显著性水平。对肠道菌群结构进行分析，表明测序数据足以呈现样本中的大多数物种(图2A和B)，并显示出三组样本之间存在差异（图2C和D）。
图2 三组肠道菌群结构比较
菌群主要门是厚壁菌门，其次是拟杆菌门、变形菌门和放线菌门（图3A-D）。热图显示了参与者与微生物样本中所代表的选定属的丰度水平之间的相关性（图3E）。
图3 与健康对照组相比，HBV组和OBI组的肠道菌群在门(A)和属(B)水平上的变化。HC、OBI或HBV组中每个样本的肠道菌群的门(C)和属(D)组成。该柱仅显示丰度水平前10个门或属。(E)热图显示HC、OBI或HBV组中属水平的变化。
3. HBV携带者和OBI献血者之间的肠道菌群发生改变
采用直线判别分析效应大小（LEfSe）对HBV携带者和OBI献血者的肠道菌群进行分析，结果显示，差异细菌组成中，OBI组有7个属的丰度相对较高，而HBV组有5个属的丰度相对较高。在各鉴别属中，巨单胞菌属和罕见小球菌属的值和丰度最高。经F检验，HBV携带者中罕见小球菌属的丰度为1.79%，低于OBI组的5.37%(P<0.05)。HC组中罕见小球菌属的丰度处于中等水平，与其他两组相比无统计学差异(数据未显示)。通过构建关联网络，在属水平上分析相互作用，发现罕见小球菌属与阿加杆菌属、普雷沃氏菌和粪杆菌属呈正相关(图4）。
图4 HBV携带者和OBI献血者肠道菌群改变的特征
4. 健康对照组和OBI献血者的肠道菌群发生改变
健康对照组和OBI献血者的肠道菌群比较结果如图5所示，差异细菌组成中，OBI组中有10个属的丰度相对较高，而健康对照组中有7个属的丰度相对较高。在这些差异属中，粪杆菌的LDA值和丰度最高。通过构建关联网络并分析属水平上的相互作用，发现粪杆菌与另枝菌属呈正相关，但与
图5 健康对照组和OBI献血者肠道菌群改变的特征
5. KEGG代谢通路分析显示三组间不同功能占比
通过分析KEGG代谢途径的组成，确定了三组样品中微生物群落中功能基因代谢途径的差异和变化。利用KEGG功能预测，OBI组与健康对照组间比例差异最大的代谢途径为碳水化合物代谢（图6A）。与HBV携带者相比，OBI献血者的样本在膜转运代谢途径中上调幅度最大（图6B）。而与人类肠道菌群中最常见的属之一的拟杆菌相比，罕见小球菌属中相对丰度变化最大的前10条功能途径中有3条也属于膜转运类（图7）。
图6 与健康对照组（ A）或 HBV 携带者（B）相比，OBI 献血者的肠道微生物群的 KEGG 通路分析
图7 罕见小球菌属基于KEGG的功能基因预测
三、研究结论
研究收集了18例HBV携带者、20例健康献血者和24例OBI献血者的粪便样本，利用16S测序分析三组肠道菌群组成的差异，发现与HBV携带者相比，OBI献血者肠道菌群中亚微颗粒菌的丰度显著增加，这可能刺激免疫激活，促进隐匿性感染的形成。本研究结果可能揭示肠道菌群在OBI形成中的作用，为HBV感染的治疗提供新的策略。
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