研究首先成功分离并表征了两种心肌细胞来源的外泌体：常氧对照外泌体Ctrl-EVs与缺氧复氧处理后的外泌体H/R-EVs。透射电镜显示两者均呈典型类外泌体球形结构，Western blot验证CD9、CD63、TSG101等标志物阳性，无钙联蛋白污染；纳米颗粒追踪分析显示粒径集中在30-200纳米，符合外泌体特征。体内外实验均证实，H/R-EVs可被巨噬细胞高效摄取，且心肌局部注射后能长时间滞留，为其发挥生物学作用奠定基础。
图1 常氧和缺氧复氧条件下心肌细胞来源外泌体的表征与摄取
在小鼠心梗模型中，H/R-EVs展现出显著的心保护作用。
图片图2 缺氧复氧条件下的外泌体减轻心梗后的心肌损伤和炎症反应
心肌组织免疫分析显示，心梗后促炎表型M1巨噬细胞（CD86+F4/80+）数量显著增加，而H/R-EVs治疗后M1巨噬细胞比例下降，抗炎表型标志物IL-10、Arg-1表达升高，证实H/R-EVs可调控巨噬细胞极化平衡，改善局部炎症微环境。
图3 缺氧复氧条件下的外泌体在体内调控心肌巨噬细胞极化和炎症因子表达
体外实验中，脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞向M1极化，表现为CD86表达升高、促炎因子释放增加、吞噬功能受损。而H/R-EVs处理后，上述M1表型特征明显逆转，Arg-1表达上调，吞噬功能恢复，直接证实H/R-EVs对巨噬细胞促炎极化的抑制作用。
图4 缺氧复氧条件下的外泌体抑制脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞M1极化
通过小RNA测序发现，miR-199b-3p是H/R-EVs中显著高表达的微小RNA，且富集于EVs腔室内。生物信息学预测结合双荧光素酶报告实验证实，miR-199b-3p可直接靶向纤维蛋白原样蛋白2。Western blot显示，心梗组织和脂多糖刺激的巨噬细胞中纤维蛋白原样蛋白2表达均升高，而H/R-EVs或miR-199b-3p过表达可显著抑制其表达。
机制研究表明，纤维蛋白原样蛋白2可与TLR4相互作用激活NF-κB信号通路，促进巨噬细胞M1极化。miR-199b-3p通过靶向抑制纤维蛋白原样蛋白2，下调TLR4/NF-κB通路激活，减少IKK、IκB、NF-κB磷酸化，进而抑制促炎反应。实验也证实，敲低miR-199b-3p或过表达纤维蛋白原样蛋白2可逆转H/R-EVs的保护作用。
体内验证显示，miR-199b-3p激动剂可模拟H/R-EVs的效果，改善心梗小鼠心功能、减少梗死面积；而AAV9介导的纤维蛋白原样蛋白2过表达会抵消该保护作用，进一步证实纤维蛋白原样蛋白2是miR-199b-3p的关键下游靶点。此外，H/R-EVs预处理的巨噬细胞条件培养基可减少缺氧缺糖诱导的心肌细胞凋亡，表明调控后的巨噬细胞可间接保护心肌细胞存活。
图5 miR-199b-3p通过靶向纤维蛋白原样蛋白2减轻心梗小鼠的心肌损伤和炎症反应
该研究清晰阐明了H/R-EVs/miR-199b-3p/纤维蛋白原样蛋白2/NF-κB轴调控心梗后炎症的核心机制：缺氧预处理心肌细胞释放的外泌体作为天然递送载体，将miR-199b-3p转运至巨噬细胞，靶向抑制纤维蛋白原样蛋白2表达，阻断TLR4/NF-κB通路激活，从而抑制巨噬细胞M1极化、减轻过度炎症，最终保护心肌功能。这一发现不仅丰富了心梗免疫调节的分子机制，更确立了miR-199b-3p/纤维蛋白原样蛋白2轴作为潜在治疗靶点，为开发外泌体介导的精准靶向治疗策略提供了重要实验依据，有望为广大心梗患者带来新的治疗希望，推动
参考文献：
Zhang Z, Shen H, Zhang S, et al. Hypoxia-preconditioned cardiomyocyte-derived extracellular vesicles alleviate myocardial ischemic injury by reprogramming macrophage polarization via the Fgl2/NF-κB pathway. Int Immunopharmacol. 2026;170:116077. doi:10.1016/j.intimp.2025.116077
来源：生物谷
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