作者：肖亮博，广州开发区医院检验科

前言

从2000年开始，全球范围内先后暴发多轮新发呼吸道传染病疫情，细数历次重大疫情：2003年严重急性呼吸综合征（SARS）疫情、2005年人H5N1感染高致病性禽流感疫情、2009年甲型H1N1流感大流行、2012年中东呼吸综合征（MERS）疫情、2013年人感染H7N9高致病性禽流感疫情，以及2019新型冠状病毒（COVID-19）疫情等重大公共卫生事件，给全球公共卫生安全与群众生命健康带来了严峻挑战。

除上述重大疫情外，人鼻病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒等常见呼吸道传染病原体也长期潜伏在日常生活中，持续威胁着人们的身体健康。

对于常见的快速呼吸道病原体检测，我实验室近年来开展项目有甲型流感病毒抗原检测、乙型流感病毒抗原检测、肺炎支原体抗原检测、腺病毒抗原检测、呼吸道合胞病毒抗原检测共五个项目，采用胶体金标记的免疫层析法检测。

抗原检测技术原理

免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种免疫标记技术，它的主要优势是操作简单快速方便、敏感特异、稳定性强[1]，应用范围广，使用场景要求简单，不需要特殊的仪器设备，试剂稳定、常温可运输储存，且大多数试剂反应能在15—30分钟内完成；同时，该检测技术的缺点也是比较明显的：灵敏度相对较低，易漏检低浓度样本，难以实现精准浓度测定，易受标本一些高浓度因素干扰等等。

抗原检测技术缺点

检验人员普遍知晓，呼吸道病原体抗原检测的标本通常采集自患者的咽拭子或鼻拭子。采用免疫胶体金技术检测呼吸道病原体抗原标本时，标本质量是整个检测流程中最为关键的环节。检验前阶段的标本采集是否合格、操作是否规范[2]以及病原体载量的高低，均可直接影响检测结果。简言之，不合格的标本往往会导致假阴性结果。

然而，对于检验中环节的工作人员而言，无法判断该阴性结果为真阴性还是假阴性。检验人员除严格遵循标准操作规程开展检测、依据实验有效性判读结果外，只能依托前端标本采集人员的规范操作，才能保障检验结果的准确性。

既然检测环节存在漏洞，那么及时填补就至关重要。如何从检验前阶段更好地把控标本质量、获取高质量标本，是决定检测结果准确性的关键。这就好比厨师拿到变质、不合格的原材料，即便厨艺再精湛，也无法烹制出令人满意的菜品。

因此，从标本的采集开始，我们引入了一个名词：‌内源性内标。是指在核酸检测中，利用‌人体细胞中固有的管家基因‌（house-keeping gene）作为内参，用于监控从采样、核酸提取到扩增全过程的质量与可靠性。比如RNase P（核糖核酸酶 P）[3]，它是人体细胞中普遍存在、高度保守的管家基因，也是核酸检测中最常用的内源性内标。

内源性内标的作用可简要概括为：

凭借其在核酸检测过程中的稳定表达，有效监测三大关键环节：1、样本采集是否合格，是否采集到足够的靶细胞；2、核酸提取是否成功，是否获得有效核酸模板；3、PCR扩增是否有效，扩增体系是否正常。

它能尽可能帮助检验人员判断结果准确性，减少假阴性的发生。此处强调“尽可能”，是因为PCR技术灵敏度高、操作要求严谨，若检验过程操作不当，易引发片段污染，进而影响检测结果。

为提升检验结果准确性，避免因标本采集不当导致假阴性，我实验室近期引入呼吸道病原体核酸检测，检测项目包括甲型流感病毒、乙型流感病毒、新型冠状病毒、呼吸道合胞病毒、人鼻病毒、腺病毒及肺炎支原体。现将收集的相关数据与各位检验同行分享交流。

不同方法学的结果数据分析比对

中国疾病预防控制中心每周发布全国急性呼吸道传染病哨点监测情况，动态公布门急诊及住院呼吸道样本的病原体检测阳性率。我实验室于2026年 1月中旬正式开展呼吸道病原体核酸多项联检，1、2月份也正好为流感高峰期[4]。

为便于比对分析，整理了两个关键时段的检测数据：一是2026年1—2月（核酸项目开展至今的累计总量），二是2026年2月（完整单月检测量），并将上述数据与2025年、2026年全国同期哨点监测数据进行对比分析。

通过以上阳性率统计数据与中国疾病预防控制中心公布的“全国急性呼吸道传染病哨点监测情况”中的阳性率对比可以看出，目前核酸检测阳性率与全国哨点医院公布的阳性率更为接近，已达到甚至超过全国平均水平（病原体实际感染率存在南北方地域差异），新增的人鼻病毒核酸检测阳性率即为典型例证。除了肺炎支原体暂未检测出阳性外，其他几个病原体感染率均有比较大的提升，特别是呼吸道合胞病毒和腺病毒，其阳性检测率在呼吸道病毒感染高发期实现了“零”的突破。

纵观全年抗原检测阳性率统计结果，除甲型流感病毒外，其余项目的阳性率均处于极低水平。如前所述，抗原检测（胶体金法）阳性率偏低，除方法学本身灵敏度受限、易造成低浓度样本漏检外，标本采样不合格也是重要原因。

实例分享

举一实例：某成年男性送检呼吸道样本进行核酸检测，检验人员严格按照标准操作规程处理样本并上机检测后，仪器结果提示IC无效，内标无信号。

实验结束后，工作人员对反应后的耗材进行核查，确认反应仓盖板密闭良好，仓内液体量无明显减少；结合原始扩增曲线分析，该标本存在正常扩增现象。

结合检验工作经验判断，该标本出现内标无信号的核心原因是采样不合格，没有采集到足够的细胞，以至于浓度稳定的RNase P都没能很好的拷贝扩增成功，因此工作人员要求患者重新去采样室采样，当第二份标本重新上机检测，结果出来后显示IC合格，InfA阳性，提示患者感染甲型流感病毒。

标本不合格所带来的问题

这一案例还引发了一段小插曲：前文已提及该标本来自成年男性，正常情况下，成年人咽拭子采集相较于婴幼儿更为简便，采集者对采集力度和深度也更容易把控。因此，当患者需返回采样室重新采样时，因检测结果延时需重新采样产生不满情绪；采样护士认为自身操作规范，质疑问题出在检验科检测环节；检验科工作人员则因试剂成本浪费、报告周转时间（TAT）受影响倍感无奈。

一份不合格的标本，引发了多方面的连锁反应，而最核心的受损方，始终是患者——不仅延误了诊断与治疗，还增加了反复采样的时间与精力成本。

一份不合格的标本所引发的连锁反应，充分暴露了呼吸道病原体检测中各环节衔接的重要性。如何保障患者利益，提升检测结果准确性？关键在于对检验前、检验中、检验后全流程实施闭环式质量监管，任一环节执行不到位，都会直接影响最终检测结果的可靠性。

结语

各实验室的硬件条件、技术能力存在客观差异，所能选用的检测方法也不尽相同，胶体金法抗原检测与实时荧光PCR核酸检测并无绝对优劣，二者各有其局限性与适用性：抗原检测适配快速筛查、基层医疗机构等无专业仪器的场景，核酸检测则适配需要精准诊断、高检出率的临床场景，需结合实际需求合理选择。

但无论选用何种检测方法，流程规范都是保障结果可靠的前提。在实验室具备硬件、技术、人员等条件的前提下，选用高灵敏度的检测方法（如核酸检测），实现病原体阳性率的合理提升，能为临床医生的诊断提供更有力的辅助依据，有效避免漏检，从而更精准地服务患者、指导临床治疗。

高灵敏的检验技术是提升检测结果可信度的基础，而检验全流程各环节的质量保障，才是决定检测结果准确性的核心关键。从标本采集的源头规范操作，到检验中的标准化实验与质控监控，再到检验后的结果复核与临床沟通，每一个环节的严格把控，都是减少假阴性、保障患者利益、提升检验服务质量的根本所在。

专业审核：罗欲承（兴化市人民医院）

参考文献

[1]张德玺,韩洪彦,王希良.一种快速检测甲型流感病毒的方法[J].中国比较医学杂志, 2007, 17(1):4.DOI:10.3969/j.issn.1671-7856.2007.01.013.

[2]《新型冠状病毒咽拭子采集技术管理规范》

[3]Zhang Y, Wang C, Han M, et al. Discrimination of False Negative Results in RT-PCR Detection of SARS-CoV-2 RNAs in Clinical Specimens by Using an Internal Reference. Virol Sin. 2020;35(6):758-767. doi:10.1007/s12250-020-00273-8

[4]许新强,李雪松,何伟业,等.2019年广州白云区医院监测点关于甲型流感和乙型流感流行情况分析《中华临床实验室管理电子杂志》2023，11(04)10.3877/cma.j.issn.2095-5820.2023.04.006

来源：检验医学