作者：王秀娣，乐亮，朱碎永，林甲进等，温州医科大学附属第二医院育英儿童医院输血科

H血型系统为国际输血协会(ISBT)命名的018血型系统,只有1个抗原即H抗原,可分H表现型和H抗原缺失型。H抗原缺失型又分孟买型和类孟买血型,类孟买血型是一种非常罕见的稀有血型[1-3]。随着分子基因测序技术的推进,陆续发现类孟买血型基因突变个案[4-7]。本研究收集2019年以来在血型检验过程中发现的6例类孟买个体血样本,对其进行血型血清学、FUT1和FUT2基因测序及后续输血方案分析,现将结果报告如下。

1　资料与方法

1.1　资料

收集2019年1月—2023年12月我院血型检测发现ABO正反定型不一致、疑似类孟买血型者6例,其中男女各3例,年龄35~74岁。征得先证者知情同意,并经医院伦理委员会审核同意后,抽取其静脉全血3 m L置于EDTA-k2抗凝管中待检。

1.2　试剂仪器

单克隆抗-A、抗-B定型试剂(批号:20211030)、抗-A1凝集素试剂(批号:20210221)、单克隆抗-H定型试剂(批号:20201126)均由上海市血液生物医药有限责任公司提供;反定型A、B、O型红细胞取3人份同型供血者血液洗涤3次由本科室制备,当日使用;凝聚胺介质试剂(批号:20210221)由贝索试剂有限公司提供;DNA提取液试剂由北京天根生化科技有限公司提供;人类H血型系统基因分型检测试剂由江苏省伟禾生物科技有限公司提供。PCR仪(ABI9700)、DNA测序仪(ABI3130)由美国ABI公司提供。

1.3　方法

1.3.1　血型血清学检验　ABO血型正反定型采用常规盐水试管法、H抗原检测采用试管盐水法;弱A、弱B检测采用吸收放散试验[8];交叉配血采用凝聚胺介质法。试剂在有效期内使用,操作严格按试剂说明书进行。

1.3.2　DNA提取　采用DNA提取液进行DNA结合、纯化,核酸样本ODA260/A280:1.6~2.0。1.3.3　FUT1、FUT2基因分型及测序　基因分型采用PCR-SBT法,按照人类H血型系统基因分

型检测试剂盒进行分型。测序采用Sanger测序法。检测及测序委托江苏省伟禾生物科技有限公司完成。

1.3.4　基因结果判读　各测序图谱采用Chromasversion2.6.5软件阅读,根据ISBT提供的NamesforH(ISBT018)Blood Gour p Alleles文件综合判断阅读结果(以FUT1、FUT2为参考序列)。

2　结果

2.1　6例类孟买血型ABO血型血清学和FUT1、FUT2基因测序结果6例先证者红细胞与单克隆抗-A、单克隆抗B、抗-H发生不凝集反应;血清与红细胞悬液发生正反定型不一致反应;FUT1基因型:3例为c.551-552del AG、1例为c.551-552del AG/c.881-882del TT、1例为c.551-552del AG/c.755 G>C、1例为c.551-552del AG/c.658C>T;FUT2基因型:5例为c.357C>T,1例为c.716G>A。吸收放散试验证实先证者1~2红细胞上存在弱A抗原,先证者3~6红细胞上存在弱B抗原,血清学结合基因测序推断为类孟买血型,分别是Amh2例、Bmh4例。6例类孟买血型ABO血型血清学和FUT1、FUT2基因测序结果见表1、图1~6。

2.2　6例类孟买血型者血清与A型、B型、O型红细胞交叉配血结果在室温和37℃下分别采用先证者血清与A型、B型、O型的悬浮红细胞行交叉配血试验,结果显示室温下先证者1、2、4与A型或B型、O型交叉配血结果不相合;37℃下先证者1~6与A型或B型、O型交叉配血相合。见表2。

3　讨论

自1979年张工梁等报道我国首例类孟买血型以来,国内已有百例类孟买血型报道[9]。文献报道类孟买血型在不同人群中的所占比例有所不同,西方人比东方人比例低,如泰国人、印度人、日本人、欧洲人分别为1/5000、1/10000、1/300000~2/300000、1/1000000[10],而中国台湾、山西、福建、香港、云南(拉祜族)、广州、湖南分别约为1/8000、1/8500、1/15620、1.88/100、2.3/100000、 4/175439[11-14]。本组6例类孟买血型FUT1基因测序分析以c.551-552del AG为主,其移码变异致氨基酸多肽链提前终止在第268位,α-1,2-岩藻糖基转移酶因不能合成H抗原失去活性,与张爱等[15]的报道结果基本一致,与刘金莲等[16]报道以c.658C>为主结果不一致。其中,c.755G>C为本团队发现[17],后续功能研究正在进行中。因文献中没有提供先证者具体祖籍、具体地域,以及采样数有限,突变基因是否具有地域性特点有待进一步收集数据统计证实。

FUT2基因与FUT1基因高度同源,本组检出的6例FUT2基因序列为c.357C>T和c.716G>A,5/6具有c.357C>T同义突变,该突变点与文献报道一致[15,18];1号样本在nt716位存在G>A错义突变,导致在239位的氨基酸由精氨酸(Arg)转变为谷氨酰胺(Gln),c.716G>A在数据库中基因型为FUT2∗09,其H抗原表达在分泌液中。此外,本文6例类孟买个体血型分别为Amh2例、Bmh4例,未发现Omh表型,与林艺璇等[19]报道Omh占50%(9/18)、Zhang等[20]报道占30%(13/43)结果不一致,可能原因为Omh血清中含正常量抗-A、抗-B抗体,血清学正反结果符合O型特点,被误认为O型,平时常规也未采用H抗体对O型血进行筛查,Omh表型可能存在漏检现象,有待后续探讨研究[21]。文献报道类孟买血型多数含室温反应的抗-HI抗体,甚至个别在37℃也有反应,虽抗-HI具有较弱溶血能力,但仍存在溶血风险[22]。为制定本文6例后续输血方案,将其血清分别与A型、B型、O型悬浮红细胞进行交叉配血试验(见表2),结果显示在室温下例1、例2、例4存在交叉配血不相合,在37℃下交叉配血均相合,分析原因,在37℃下抗-HI抗体活性存在消失的可能。因此类孟买血型个体输血,除采用自体输血外,尽可能在37℃下进行交叉配血试验,根据其结果选择最弱或无凝集无溶血的ABO同型血进行输注;对急诊输血的类孟买血型个体,根据交叉配血的结果、病情、输血科(血库)血液库存量等综合评估确定其输血方案,避免因一时找不到血液而引发抢救不及时、甚至死亡的案例发生。近期文献报道将通用O型血转化成为稀有孟买型血,解决了孟买型个体输血的难题[23],期待类孟买个体也有同样的前景[24]。因此类孟买血型的血清学鉴定及基因测序分析,对后续患者输血方案的制定具有重要意义。

参考文献略。

来源：引用本文:王秀娣,乐亮,朱碎永,等.罕见类孟买血型FUT1和FUT2基因序列及后续输血方案分析[J].临床血液学杂志,2024,37(12):901-904.

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