刘影、张婷、赵光明、倪静,大连医科大学附属第一医院皮肤科,中心实验室
瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)通道是位于真核细胞膜上的一类重要的非选择性阳离子通道,最早发现于果蝇的视觉系统,突变体果蝇对持续的光刺激产生瞬时而非持续的峰电位。大多数TRP通道为钠离子、钙离子等渗透型通道,其中瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)为钙离子渗透型通道。有研究称,TRPA1可能是唯一的眼外光转导通路,表皮黑素细胞受到紫外线辐射时,Gα/q11蛋白-磷脂酶C信号转导途径被激活,随后激活TRPA1通道使大量的钙离子内流,从而导致早期黑素合成增加。为了进一步探讨TRPA1在角质形成细胞中的光控作用,刘影等研究了在长波紫外线(UVA)、中波紫外线(UVB)作用下,HaCaT细胞中视黄醛依赖性钙离子内流的情况以及TRPA1通道抑制及激活状态下对HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子内流的影响。
将培养的HaCaT细胞分为225 mJ/cm2 UVA刺激组和25 mJ/cm2 UVB刺激组,UVA刺激组分为空白对照组(仅有HaCaT细胞)、视黄醛组、UVA组、视黄醛 + UVA组(UVA?TRPA1对照组)、视黄醛 + UVA + 肉桂醛组(UVA?TRPA1激动组)、视黄醛 + UVA + 樟脑组(UVA?TRPA1抑制组);UVB刺激组分为空白对照组(仅有HaCaT细胞)、视黄醛组、UVB组、视黄醛 + UVB组(UVB?TRPA1对照组)、视黄醛 + UVB + 肉桂醛组(UVB?TRPA1激动组)、视黄醛 + UVB + 樟脑组(UVB?TRPA1抑制组)。分组处理一定时间后,qPCR、Western印迹检测HaCaT细胞中TRPA1mRNA和蛋白表达,流式细胞仪检测各组HaCaT细胞钙离子内流的变化。
qPCR和Western印迹显示,HaCaT细胞中有TRPA1 mRNA及蛋白的表达。UVA作用后空白对照组、视黄醛组、UVA组、视黄醛 + UVA组荧光强度分别为155.06 ± 7.62、148. 37 ± 18.77、166.92 ± 3.71、331.333 ± 40.563,组间差异有统计学意义(F = 44.509,P < 0.01)。UVB作用后空白对照组、视黄醛组、UVB组、视黄醛 + UVB组荧光强度分别为150.20 ± 1.73、171.66 ± 56.23、147.56 ± 6.60、250.44 ± 9.13,组间差异有统计学意义(F = 85.261,P < 0.01),视黄醛 + UVA/UVB组荧光强度均高于空白对照组(q值分别为18.442、6.052,P < 0.01)。TRPA1激动剂和拮抗剂可调节UVA、UVB所引起的钙离子内流的变化(P < 0.001),在UVA、UVB作用下,TRPA1激动剂组荧光强度均高于对照组(q值分别为14.934、32.770,P < 0.001),TRPA1抑制剂组荧光强度均低于对照组(q值分别为7.986、14.596,P < 0.001)。
TRPA1在皮肤HaCaT细胞中有表达,UVA或UVB可通过TRPA1调控HaCaT细胞的钙离子内流。
来源:中华皮肤科杂志,2017,50(10):710-714。
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