代谢功能障碍相关脂肪肝病（MASLD）是全球最常见的慢性肝病，可进展为代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）、肝纤维化甚至肝细胞癌（HCC）。MASLD相关HCC对免疫检查点阻断（ICB）疗法通常不敏感，且治疗选择有限，亟需新的治疗策略。

跨膜6超家族成员2（TM6SF2）是一种脂质代谢调节因子，对MASLD具有保护作用。然而，TM6SF2在MASLD相关HCC中的具体作用，特别是其与抗肿瘤免疫的关联，尚不明确。

本研究通过检测人类MASLD-HCC组织样本（包括15对肿瘤及癌旁组织）及公共数据库的分析，检测了TM6SF2的表达，进而构建肝细胞特异性TM6SF2基因敲除小鼠模型，并通过高脂高胆固醇（HFHC）饮食或联合二乙基亚硝胺（DEN）注射，诱导MASLD-HCC。此外，原位MASLD-HCC小鼠模型的建立，用于评估TM6SF2敲除或过表达对肿瘤的影响。

利用RNA测序、流式细胞术、多靶点免疫荧光等技术分析肿瘤免疫微环境。利用抗体清除CD8⁺ T细胞或中和白细胞介素-6（IL-6），验证其在TM6SF2介导的肿瘤抑制中的作用。通过拉下实验、免疫共沉淀和蛋白质印迹实验，探究TM6SF2的下游分子机制。最后，在荷瘤小鼠中评估了腺相关病毒（AAV8）介导的TM6SF2过表达与抗PD-1疗法（单独或联合仑伐替尼）联合使用的治疗效果。

一、 肝细胞特异性TM6SF2缺失加速小鼠MASLD-HCC进展

在人类MASLD-HCC肿瘤组织中，TM6SF2的mRNA和蛋白水平均显著低于癌旁正常组织。在肝细胞特异性TM6SF2敲除小鼠中，无论是单纯HFHC饮食诱导，还是DEN联合HFHC饮食诱导，其肝脏肿瘤数量、最大肿瘤直径以及肿瘤细胞增殖标志物Ki-67阳性细胞比例均显著高于野生型对照小鼠。血清甲胎蛋白（AFP）、高尔基体蛋白73（GP73）、骨桥蛋白（OPN）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平也更高，表明TM6SF2缺失加剧了肝损伤和肿瘤形成。

二、 TM6SF2通过激活CD8⁺ T细胞发挥抗肿瘤作用

RNA测序结果显示，TM6SF2敲除小鼠肿瘤组织中免疫相关通路，特别是“细胞因子-细胞因子受体相互作用”通路显著富集。流式细胞术和免疫荧光分析发现，在TM6SF2敲除的转基因小鼠和原位移植瘤小鼠模型中，肿瘤内CD8⁺ T细胞，尤其是分泌干扰素-γ（IFN-γ）的细胞毒性CD8⁺ T细胞数量显著减少。相反，TM6SF2过表达则能增加这些抗肿瘤免疫细胞的数量。在人类MASLD-HCC组织中，TM6SF2表达与CD8⁺ T细胞浸润呈正相关。更重要的是，使用抗CD8抗体清除CD8⁺ T细胞后，TM6SF2过表达所带来的肿瘤抑制效应被完全消除。

三、 TM6SF2通过结合IKKβ抑制NF-κB-IL-6轴进而激活CD8⁺ T细胞

在机制上，下拉实验和质谱分析发现TM6SF2与IKKβ（NF-κB信号通路的关键激酶）直接结合。TM6SF2缺失导致IKKβ磷酸化水平升高，进而激活NF-κB信号通路，促进其下游靶基因IL-6的转录和分泌。在体外实验中，TM6SF2敲除的肝癌细胞上清液会抑制CD8⁺ T细胞的增殖和细胞毒性功能，而中和IL-6或使用NF-κB抑制剂（TPCA-1）均可逆转这种抑制作用。在体内实验中，使用抗IL-6中和抗体处理TM6SF2敲除的荷瘤小鼠，可以恢复肿瘤内CD8⁺ T细胞功能并抑制肿瘤生长。

四、 激活TM6SF2可增强MASLD-HCC对免疫治疗的反应

研究进一步探讨了激活TM6SF2能否改善ICB疗效。结果显示，在MASLD-HCC小鼠模型中，抗PD-1单药治疗无效。然而，通过AAV8载体引入TM6SF2后，联合抗PD-1治疗可显著抑制肿瘤生长，并伴随肿瘤内CD8⁺ T细胞和IFN-γ⁺CD8⁺ T细胞的显著增加。此外，在抗PD-1联合仑伐替尼的基础上，加入AAV8-TM6SF2的三联疗法显示出最强的肿瘤抑制效果。

本研究表明，肝细胞TM6SF2通过直接结合IKKβ抑制NF-κB信号通路，减少IL-6的分泌，从而激活细胞毒性CD8⁺ T细胞，在MASLD-HCC发展中发挥保护作用。TM6SF2的缺失会创造一个免疫抑制微环境，促进肿瘤发生。通过AAV病毒载体激活TM6SF2，能够恢复抗肿瘤免疫力，并显著增强抗PD-1疗法对MASLD-HCC的疗效。因此，TM6SF2是治疗MASLD-HCC的一个潜在新靶点，有望用于改善免疫治疗反应。

审批编号：CN-173653

有效期至：2026/12/2

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