间质-上皮细胞转化因子（MET）扩增不仅是重要的非小细胞肺癌（NSCLC）原发致癌变异，也是引起表皮生长因子受体（EGFR）阳性NSCLC患者接受酪氨酸激酶抑制剂（TKI）类药物靶向治疗时常见的耐药机制。荧光原位杂交（FISH）是目前检测MET扩增的金标准，微滴式数字PCR（ddPCR）也逐渐展示出精准检测的实力。

近日，一项研究¹探讨了血浆ddPCR在检测局部晚期或转移性NSCLC患者MET扩增的性能，并分析了MET拷贝数变异（CNV）的纵向监测对MET扩增晚期NSCLC患者治疗决策的影响。医脉通特邀该研究主创团队——广东省人民医院的杨衿记教授、颜黎栩教授和苏俊威医生，深入解读这一研究的结果及其临床意义。

立足临床未满足之需，数字PCR唱响MET扩增中国强音

根据最新发布的2022年中国恶性肿瘤疾病负担数据显示，肺癌仍是我国恶性肿瘤发病率第一的瘤种，2022年新发病例106.06万人²，其中约85%的肺癌为NSCLC。杨衿记教授介绍道，MET扩增是NSCLC中关键的致癌驱动因素之一，也是EGFR或ALK等靶点的重要耐药机制之一，具有重要的临床意义。苏俊威医生补充道，三代EGFR-TKI奥希替尼在不同治疗线数耐药后出现MET扩增比例有所不同，一线耐药后发生MET扩增的比例大约为7%-15%，而二线耐药后发生MET扩增的比例大约为5%-50%³。目前已有研究证据表明EGFR-TKI耐药MET扩增的患者可以从EGFR以及MET双靶联合中获益，因此精准检测MET扩增对于实现非小细胞肺癌患者的精准诊疗以及改善预后至关重要。

然而在临床实践中，MET扩增检测仍存在困境。杨衿记教授指出，FISH是检测MET扩增的金标准，但是约70%的晚期NSCLC肺癌患者经后线治疗后很难获得组织样本，FISH无法适用。此外部分患者病灶太小、身体状况较差不适合穿刺；治疗后的耐药性也使得反复活检变得困难。因此，亟需一种不依赖于组织的方法实现MET扩增检测。颜黎栩教授分享道，ddPCR技术因其高灵敏性和高特异性，在检测肿瘤相关基因变异，包括MET扩增的精准检测方面显示出了出色的潜力。ddPCR通过将样本分割成数千至数万个微滴，每个微滴进行独立的PCR反应，使得即使在极低的目标序列丰度下也能实现高精度的定量。基于此，杨衿记教授团队开发了一种ddPCR检测MET扩增的方法，通过分析FISH和血浆ddPCR检测MET扩增的一致性，评估不同MET扩增检测方法对MET-TKI治疗效果的影响，为血浆ddPCR检测MET扩增的临床效用提供了真实世界证据支持。

ddPCR媲美FISH，有望成为MET扩增检测有力工具

该项真实世界研究共纳入87名局部晚期或转移性NSCLC患者，获得94对组织和血浆样本。所有患者都接受了FISH MET扩增检测，其中FISH阳性患者23例（27个样本），FISH阴性患者64例（67个样本）。FISH阳性患者中，15例（65.2%）在EGFR-TKIs治疗后获得了MET扩增，6例（26.1%）为原发性MET扩增，2例（8.7%）同时有MET跳突和原发性MET扩增。17例阳性患者（73.9%）以及1例阴性患者（MET 14跳突，非MET扩增）在活检后接受了MET-TKI治疗。

图1：研究流程图

研究结果显示，血浆 ddPCR 在 MET 扩增检测中与 FISH 基本一致（灵敏性：74.1%；特异性：92.5%；准确性：87.2%；kappa 值为 0.68），并且优于组织 NGS（kappa 值为 0.64）。血浆 ddPCR 和组织 NGS的组合与 FISH具有高度一致性（灵敏性：92.3%；特异性：89.2%；准确性：90.1%；kappa 值为 0.77）。该研究提示血浆 ddPCR 是检测晚期 NSCLC 患者 MET 扩增的潜在可靠方法，血浆 ddPCR 和组织 NGS 可能作为 MET 扩增检测的替代或补充方法。

图2：FISH和ddPCR MET扩增诊断性能一致性分析。（a）MET-FISH阳性组和阴性组ddPCR比率的小提琴曲线图。（b）MET-FISH阳性组和MET-ddPCR阳性组的维恩图。（c）ddPCR阳性和FISH阳性样本之间的总体相关性。（d） 血浆ddPCR的ROC曲线分析。

基于研究中ddPCR检测MET扩增的出色表现，颜黎栩教授解析道，与NGS相比，ddPCR在检测血浆中MET扩增方面表现出更高的灵敏性，从而提高了对MET扩增的检测准确率，特别是对于那些可能从MET-TKI中获益的患者而言，这一优势更加显著。与FISH相比，ddPCR具有利用血浆样本进行检测的独特优势，而FISH只能检测组织样本。结合血浆ddPCR和组织NGS检测MET扩增的方法提出了一种新的多维度检测策略，可以显著提高MET扩增的检测准确性和灵敏性。这种组合方法有望成为FISH检测的潜在替代或补充方法，为临床应用带来更广泛的前景。杨衿记教授强调，ddPCR检测MET扩增不仅为临床决策提供了更多的灵活性和精确性，也为未来的研究和治疗策略开辟了新的方向。随着进一步的验证和优化，血浆ddPCR有望成为NSCLC患者管理中不可或缺的工具。

ddPCR具有预后和动态监测价值，助力MET-TKI精准治疗

研究进一步分析了血浆ddPCR检测MET CNV对于MET扩增晚期NSCLC患者的治疗决策的影响。接受MET-TKI治疗的患者均具有可观的客观缓解率（ORR）、疾病控制率（DCR）和中位无进展生存期（mPFS），不同检测方法下（FISH，血浆ddCPR，组织NGS，以及组织NGS结合血浆ddPCR）检测MET扩增阳性患者的ORR没有统计学差异性，不同检测方法下的mPFS也具有可比性。后续对MET-TKI患者进行了血浆ddPCR评估，在应答过程（基线/应答/PD）中ddPCR比率的变化无显著差异，但在应答3个月后及PD时，ddPCR的比率均有上调。杨衿记教授分享，在接受MET-TKI治疗的患者中，血浆中MET扩增水平的变化可能反映了患者对治疗的响应和疾病进展的风险。ddPCR技术通过治疗前、治疗中和治疗后动态监测MET扩增状态，为及时调整治疗策略提供了可能，尤其是在患者出现治疗耐药时，可以快速发现问题并做出相应的治疗调整，并有助于预测患者的长期治疗效果和生存预期。希望未来有更多大型临床研究证实血浆ddPCR纵向监测MET扩增的临床价值。

图3：不同方法或分组的PFS风险比

颜黎栩教授认可了高灵敏性的ddPCR在检测ctDNA上的优势并进一步提出了对ddPCR应用于MET扩增检测的期许。她表示，未来需要提高ddPCR检测通量，覆盖更多临床有效的基因变异和耐药基因的检测。此外，ddPCR临床检测尚无国家或行业统一标准，且缺乏商品化的室内质控品，因此需要建立适宜的室内质控措施，建立规范化的标准检测分析流程。随着对实验方法的不断探索，ddPCR技术必将迈向更为完善的境地，成为MET扩增检测的前沿利器，为医学进步开辟新的篇章。

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